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    植物亚细胞定位试剂盒

    • 型号

    植物亚细胞定位试剂盒

    1. 详细信息

      植物亚细胞定位试剂盒            10次装

       

      【保存】

      常温保存12个月,裂解用酶-20℃保存

       

      【产品说明】

      该试剂盒用于基因与荧光蛋白融合表达载体在植物原生质体中的亚细胞定位研究。

      成分:裂解用酶5支;酶储液;CaCl2溶液;BSA;AL1溶液;AL2溶液;AL3溶液。

       

      【用途】

      蛋白在植物细胞器定位的研究,包括质膜,液泡膜,线粒体,叶绿体,Golgi,TGN,PVC等。

       

      【操作方法】

      1.准备好一个培养皿,装入20ml双蒸水,培养皿的盖子用来切叶片;

      2.取4周后未抽苔前的叶子,约90片,切成1mm宽的长条,置于双蒸水中;

      3.取一支裂解用酶溶液于20ml酶解液中,55加热10min,冷却后,加入200ul CaCl2溶液0.02g BSA

      4.将步骤2中的细条捞出,置于酶解液中,黑暗,2540~50rpm酶解3h(水浴振荡);

      5.将绿色混合物置于15ml离心管,460g离心15min

      6.弃上清, 沉淀用冰冷的AL1溶液轻柔洗涤,每管4ml4100g离心1min

      7.弃上清,沉淀用冰冷的 AL1溶液4ml重悬,冰上放置30min

      8.25100g离心1min,弃上清,每管沉淀用500uAL2重悬,以下操作均在25

      9.取约10~20ug质粒于1ml 离心管中,加100ul步骤8中的原生质体,用200ul枪头(剪去前端),轻柔混匀;

      10.加入110ul AL3 溶液,轻柔混匀,放置20~30min;

      12.加入440uAL1溶液,来回颠倒混匀,25100g离心1min

      13.弃上清,加1ml AL1 混匀;

      14.上述混合物置于六孔板内,25 避光,6~18h


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